(样本1、2、3)、6个中表达样本
(样本4、5、6、7、8、9)和7个高表达样本
(样本10、11、12、13、14、15)。 1.2 实验试剂 RNA提取:采用DNA酶
(10% DNase I)去除DNA酶残留,并使用RNA提取试剂盒从水稻根尖和茎尖中提取RNA。 cDNA合成:使用cDNA合成试剂盒将RNA转化为cDNA。 qPCR扩增:使用实时荧光定量PCR扩增目标基因。 1.3 实验过程 首先对每个样本的RNA提取、cDNA合成和qPCR扩增进行实验,得到每个样本的cDNA和qPCR扩增产物。然后对每个样本的cDNA进行测序,获取每个样本的基因表达情况。 1.4 数据处理 对每个样本的RNA提取、cDNA合成和qPCR扩增产物进行质量控制,包括RNA提取液的浓度、cDNA合成反应的时间和温度、qPCR反应的体积和浓度等。 2. 结果分析 对每个样本的RNA提取、cDNA合成和qPCR扩增产物进行测序,得到每个样本的基因表达情况。分析结果表明,水稻在不同生长阶段表现出不同的基因表达特点。 2.1 样本1-3 样本1、2、3分别对应水稻生长阶段的拔节期、孕穗期和灌浆期。在拔节期中,水稻叶片颜色逐渐变绿,长势逐渐加快,此时表达水平较高的基因有NAB1、NBS1、R1A、R3A;在孕穗期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB2、NBS2、R2A、R3B;在灌浆期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB3、NBS3、R1B、R2B。 2.2 样本4-6 样本4、5、6分别对应水稻生长阶段的分蘖期、小穗期和成熟期。在分蘖期中,水稻叶片颜色逐渐变绿,长势逐渐加快,此时表达水平较高的基因有NAB1、NBS1、R1A、R2A;在成熟期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB2、NBS2、R3A、R3B。 2.3 样本7-14 样本7、8、9、10、11、12、13分别对应水稻生长阶段的灌浆期、成熟期和衰老期。在灌浆期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB1、NBS1、R1A、R2A;在成熟期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB2、NBS2、R3A、R3B;在衰老期中,水稻叶片颜色逐渐变黄,长势逐渐减弱,此时表达水平较高的基因有NAB3、NBS3。 3. 结论 本实验采用dmpk实验方案对水稻基因表达进行了分析。实验结果表明,水稻在不同生长阶段表现出不同的基因表达特点,表达水平较高的基因在水稻生长过程中具有重要的生物学意义。